细菌对于碳水化合物的代谢试验

1.糖（醇、苷）类发酵试验（1）原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶故分解糖类的能力各不相同有的能分解多种糖类有的仅能分解1～2种糖类还有的不能分解细菌分解糖类后的终末产物亦不一致有的产酸、产气有的仅产酸故可利用此特点以鉴别细菌（2）培养基：在培养基中加入0.5%～1%的糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水杨苷等）培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型（3）方法：将分离的纯种细菌以无菌操作接种到糖（醇、苷）类发酵培养基中置培养箱中培养数小时至两周后观察结果若用微量发酵管或要求培养时间较长时应保持湿度以免培养基干燥（4）结果：接种的细菌若能分解培养基中的糖（醇、苷）类产酸时培养基中的指示剂呈酸性反应若产气可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡固体培养基内有裂隙等现象若不分解培养基中除有细菌生长外无任何其他变化（5）应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要

2.氧化-发酵试验（O/F试验）（1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中必须有分子氧参加的称为氧化型氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖细菌在分解葡萄糖的过程中可以进行无氧降解的称为发酵型发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖不分解葡萄糖的细菌称为产碱型利用此试验可区分细菌的代谢类型（2）培养基：Hugh-Leifson培养基（3）方法：将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油）高度不少于1cm.将培养基于35℃培养48h或更长（4）结果：两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培养基均产酸为发酵型；若仅不加石蜡的培养基产酸为氧化型（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别前者均为发酵型而后者通常为氧化型或产碱型也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别

3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）（1）原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）而生成黄色的邻-硝基酚在很低浓度下也可检出（2）试剂：0.75MONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸馏水中在加入缓冲液（6.9gNaH2P04溶于45ml蒸馏水中用30%NaOH调整pH为7.0再加水至50ml）5ml置4℃冰箱中保存0NPG溶液为无色如出现黄色则不应再用（3）方法：从克氏双糖铁培养基上鳃于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液加入一滴甲苯并充分振摇使酶释放将试管置37℃水浴5min加入0.25mlONPG试剂水浴20min～3h观察结果（4）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应一般在20～30min内显色（5）应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性而不发酵乳糖的细菌为阴性本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定

4.七叶苷水解试验（1）原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素七叶素与培养基中枸橼酸铁的二价铁离于反应生成黑色的化合物使培养基呈黑色（2）培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基（3）方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中培养后观察结果（4）结果：培养基变为黑色为阳性不变色者为阴性（5）应用：主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别前者阳性后者阴性也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别

5.甲基红试验（1）原理：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖产生丙酮酸丙酮酸可进一步分解产生甲酸、乙酸、乳酸等使培养基的pH降至4.5以下当加入甲基红试剂则呈红色为甲基红试验阳性若细菌分解葡萄糖产酸量少或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醚、气体和水等）则培养基的酸度仍在pH6.2以上故加入甲基红指示剂呈黄色是为阴性（2）培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中培养2～4d于培养基内加入甲基红试剂立即观察结果（4）结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性（5）应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌前者为阳性后者为阴性此外肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性

6.V-P试验（1）原理：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖产生丙酮酸丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇在碱性环境中被空气中的氧氧化为二乙酰进而与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用生成红色化合物则为V-P试验阳性若培养基中胍基含量较少则可加入少量含胍基化合物如肌酸或肌酐等试验时加入a-萘酚可加速此反应（2）培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中于35℃培养48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液）振摇（4）结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性（5）应用：本试验常与甲基红试验一起使用因为前者阳性的细菌后者通常为阴性*细菌对于碳水化合物的代谢试验原理为：由于细菌各自具有不同的酶系统对糖的分解能力不同有的能分解某些糖产生酸和气体有的虽能分解糖产生酸但不产生气体有的则不分解糖据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌具体试验方法有：①糖类发酵试验是鉴定细菌最常用的生化反应特别是对肠杆菌的鉴定尤为重要；②葡萄糖代谢类型鉴别试验；③七叶苷水解试验；④淀粉水解试验；⑤甲基红试验；⑥V-P试验；⑦β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）